菌種保藏的目的,菌種保藏的方法有哪些
回答:1、目的:儘可能的保持菌種的原有性狀以及活力的穩定,保證菌種不死亡、不發生變異、不被外物污染,保持菌株的優良性狀不發生退化以及優良菌株的存活。2、原理:通過降低微生物體內的代謝,抑制生長繁殖,從而延長菌種的生命,減少變異,常用的方法為低温保藏、缺氧保藏、乾燥保藏。
一、菌種保藏的目的
1、目的
在使用和傳代的過程中,菌種容易出現污染,發生變異,死亡等情況,從而導致菌種衰退,優良菌種丟失。而菌種保藏的目的就是為了儘可能的保持菌種的原有性狀以及活力的穩定,保證菌種不死亡、不發生變異、不會被外物污染,保持菌株的優良性狀不發生退化以及優良菌株的存活。
2、原理
菌種保藏的原理是通過降低微生物體內的代謝,抑制生長繁殖,從而延長菌種的生命,減少變異。常用的方法主要為低温保藏,缺氧保藏,乾燥保藏。除此之外,避光,添加保護劑,缺乏營養等也可以提高保藏的效果。
二、菌種保藏的方法有哪些
1、斜面低温保藏法
將菌種接種到適合的固體斜面培養基上,等到菌種充分生長過後,使用油紙將棉塞部分包紮好,然後轉移至2-8℃的冰箱中進行保存。
2、液體石蠟保藏法
(1)使用三角燒瓶將液體石蠟裝好,塞上棉塞,並用牛皮紙進行包紮,0.1MPa,121.3℃滅菌30分鐘左右,然後轉移至40℃的温箱中,將水汽蒸發掉。
(2)將菌種在斜面培養基中培養,得到健壯的菌體,然後使用滅菌吸管將石蠟注入斜面上,用量為高出斜面頂端1cm為宜。
(3)將試管直立,放置在低温或者室温的環境下進行保存。
3、濾紙保藏法
(1)準備好濾紙條(0.5×1.2cm),裝入安瓿管中(0.6×8cm),每個管中放入1-2張,然後塞上棉塞,在0.1MPa,121.3℃的環境下滅菌30分鐘。
(2)將菌種在斜面培養基中培養,得到健壯的菌體,然後取出1-2ml的滅菌脱脂牛乳,滴加在滅菌培養皿內,接着取數環菌苔在牛乳內混合均勻,製成濃懸液。
(3)使用鑷子將濾紙條夾出,浸入菌懸液內,吸飽後,放回安瓿管中,塞上棉塞。
(4)將安瓿管放入裝有五氧化二磷的乾燥器,並用真空泵抽氣至幹,然後將棉花塞入管內,用火焰熔封,放置在低温下保存。
(5)當需要使用菌種的時候,將安瓿管口在火焰上燒熱,在燒熱的部位滴上一滴冷水,使玻璃破裂,再用鑷子將瓶口端的玻璃敲掉,等到打開安瓿管後,將濾紙取出,放入液體培養基內,置温箱中培養。
4、沙土保藏法
(1)取出河沙,加入10%稀鹽酸,加熱煮沸30分鐘(除去有機質)。
(2)將酸水倒掉,並用自來水將河沙洗至中性,然後進行烘乾,過篩(40目篩子),將粗顆粒去掉。
(3)取非耕作層的不含腐植質的瘦黃土或紅土,浸泡洗滌數次,直至為中性。
(4)烘乾,碾碎,過篩(100目篩子),去除粗顆粒。
(5)將沙和土按照2:1的比例混合,裝入試管中,塞好棉塞,滅菌30分鐘左右。
(6)將菌種在斜面培養基中培養,得到健壯的菌體,然後向斜面培養物中注入3-5ml無菌水,洗下細胞或孢子製成菌懸液。
(7)用無菌吸管吸取菌懸液,均勻滴入沙土管中,每管0.2-0.5ml,然後真空抽去管中的水分。如果是放線菌和黴菌可以直接挑取孢子拌入沙土管之中。
(8)將沙土管用火焰熔封,然後放置在低温(4-6℃)乾燥處保藏,或者是將沙土管直接用牛皮紙或塑料紙包好,置乾燥器內保存。保存過程中,需要每隔半年檢查一次菌種的存活性和純度。
5、甘油管保存法
(1)將80%的甘油進行高壓蒸汽滅菌。
(2)將菌種放置在斜面培養基上培養,然後使用無菌水製成高濃度的菌懸液。
(3)使用1ml的甘油與菌液混合均勻,讓甘油的濃度為10-30%左右,然後將其放置在零下70℃的環境下進行凍存。
(4)也可以使用甘油-生理鹽水(體積比8:2),和菌體肉湯混合均勻,然後放置在零下20℃的環境下進行保存。
6、冷凍乾燥保藏法
(1)在低温下將細胞快速凍結,然後在真空條件下進行乾燥,同時為了保證細胞在冷凍和水分昇華的過程中不受損害,應當使用保護劑來製備細胞細胞懸液(菌在凍結和脱水過程中起到保護作用的溶質),通過氫鍵和離子鍵對水和細胞所產生的親和力來穩定細胞成分的構型。
(2)乾燥後的菌種在真空下封裝,和空氣隔絕,從而實現長期保藏。
(3)該方法兼具低温、乾燥、除氧三方面菌種保藏的主要因素,除開絲狀真菌的菌絲體外,其它各類微生物大多都適用。
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