食用菌母種分離選育
食用菌母種主要採用人工選擇、誘變育種、雜交育種和原生質融合等手段獲得。作為一般制種專業户,可以採用人工選擇方式分離培育母種,具體步驟與操作方法如下。
1、採集種源從野生成人工栽培羣體中,選擇有代表性的優良菇體作為種源。種菇的標準是:八成熟,朵形圓正、肉質肥厚,無病蟲害。採集1—2朵符合上述標準的種菇編上號碼,作為分離母種的材料。從栽培室採集的應標有原菌株代號。
2、培養基配製瓊脂培養基又叫PDA培養基,常用配方為:馬鈴薯200—250克,瓊脂15—20克,葡萄糖20—25克,清水1000毫升。也可以加硫酸鎂1—1.5克,維生素B1微量,磷酸二氫鉀2—3克。先將馬鈴薯洗淨去皮,切成薄片,置於鋁鍋內加水煮沸30分鐘,撈起後用4層紗布過濾,取汁。然後將瓊脂加入汁內,邊加熱邊攪拌,讓瓊脂充分溶化;再將葡萄糖等加入,稍煮幾分鐘後,同樣用4層紗布過濾,取其汁液,將汁液趁熱裝入玻璃試管內。裝至管長的1/5,管口用棉花塞緊,或將汁液裝入玻璃三角瓶內,裝量20毫升。然後置於高壓鍋內,在98—108千帕/釐米的壓力下滅菌30分鐘左右。滅菌後及時取出,趁熱將試管斜排於桌上,冷卻後即成為固體斜面培養基。
3、母種分離方法有孢子彈射、組織分離和基內分離3種方法。①孢子彈射法。將種菇表面消毒,吸乾水分後,將菇體懸掛於裝有瓊脂培養基的三角瓶內,讓菇體內的袍子自然散落在培養基上萌發菌絲。也可以剪取一小決菇體,貼附在試管斜面培養基表面,讓孢子散落在培養基上萌發菌絲,即能獲得母種;②組織分離法。將消毒過的種菇,在接種箱內用手從菇柄處對半解開,或用刀片切開,使菇體形成對開。在菌蓋和菌柄交界處或菌褶處,用接種刀切取一小塊菇體,然後縱切成5×10毫米的小薄片,用接種針挑取一塊薄片,接入斜面培養基的中央,每支試管接種一小塊薄片,待其萌發菌絲,即可得到母種;③基內分離法。選擇已長菇的木段,削去樹皮及表層木質部,用70%的酒精消毒後,鋸成1釐米厚的薄片,放入0.1%的昇汞水中消毒1—2分鐘,再用滅菌水洗去殘液。然後再將小薄片劈成0.5—1釐米寬的小條,接入斜面培養基中央,待長出菌絲後即得母種。也可以在已長菇的菌袋中,經消毒處理後,用接種針鈎取袋內色澤純、長勢旺的菌絲體,接種在試管斜面培養基中央,待萌發菌絲後,同樣獲得菌種。
4、適温培養通過上述不同方式將菌種分離接種於試管後,要及時將試管移入已消毒的培養箱或培養室內培養,温度控制在25℃左右,使分離獲得的孢子或菌絲在適温下發育。一般孢子彈射3—4天后孢子萌發成菌落,10天后菌絲長滿管;組織分離接種後2—3天,菌絲即萌發,並在培養基上蔓延生長;菇木分離接種後,7天菌絲即恢復生長。
5、選育提純通過上述方法得到的菌絲,不一定都是優質的,還需要選育提純。因此,在菌絲萌發後,要認真觀察,挑選色澤純、健壯、長勢正常、無間斷的菌絲,在接種箱內連同培養基鈎取菌絲,接入另備的試管培養基上。在23—25℃的恆温條件下,培養7—10天,待菌絲長滿管後,再進行觀察,從中擇優取用,即為“母代”母種。
6、轉管擴接母代母種可以轉管擴接成“子代”母種。採用同樣的斜面培養基,每支可擴接30—50支子代母種。生產上供應的多為子代母種。它可以再次轉管擴接。一般每支可擴接成20—25支子代母種,但轉管次數不得超過5次。
7、出菇試驗分離選育的母種,還必須進行出菇試驗。方法是:把母種接種於瓶或袋裝的木屑培養基上,根據各種菇耳種性對温度的要求,進行適温培養,直至出菇才證實可用於生產。
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