北蟲草菌種人工分離的研究

1材料與方法

1.1材料試劑與儀器

1.1.1供試菌株

瀋陽棋盤山野生的蛹蟲草菌株。

1.1.2培養基

馬鈴薯100g、葡萄糖10g、牛肉膏5g、KH2PO40.5g、MgSO40.25g、瓊脂10g，加蒸餾水至500mL，煮沸使瓊脂完全融化，高壓蒸汽滅菌121℃，30min。

1.1.3試劑

75％酒精，無菌水。

1.1.4主要儀器

手提式壓力蒸汽滅菌鍋、分析天平、超淨工作台、HPX-9082MBE數顯電熱培養箱，其他常用玻璃儀器等。

1.2試驗方法

1.2.1不同的組織部位分離方法比較

（1）子實體分離法

在超淨工作台上將蟲草子實體用75%酒精浸泡1min，無菌水沖洗3次，再用小刀分別切取子實體頂端、中部、根部，然後接種到斜面培養基上，18℃恆温培養15d。觀察不同組織部位對北蟲草萌發天數、長勢、滿管時間的影響[1]。

（2）孢子分離法

上述方法洗滌得到的子實體，用小刀切取尖端，懸掛在三角瓶棉塞下端的不鏽鋼彎鈎上，通過懸掛蟲草子實體，使頂端朝下，散落下來的孢子落在培養基上，從而繼續生長，併產生白色菌絲。在培養的前期，要保證室温不能過高，因此本試驗在培養時，將三角瓶置於充滿涼水的盆中，並需要每天換水，維持較低的水温。在18℃恆温培養5d後，無菌條件下取出子實體尖端，將三角瓶放回，繼續培養10d[2]。

1.2.2不同的消毒方式比較

以子實體頂端為例，處理方法見表1。

接種到斜面培養基上，18℃恆温培養15d。觀察不同消毒方式對北蟲草萌發天數、長勢、滿管時間的影響。

1.2.3繼代培養試驗

挑選長勢好的分離菌種，接種到玻璃瓶中，將玻璃瓶放入培養室培養。

2結果與分析

2.1組織分離法分離北蟲草菌種的研究

2.1.1不同組織部位對北蟲草萌發天數的影響

通過對同一株北蟲草分別切取頂端、中端和根部，採用相同的消毒方式進行除菌。可以看出，在培養的最初階段，在培養頂端和中端部位的試管中，北蟲草兩端均有白色菌絲生長，而在培養根部部位的試管中，沒有白色菌絲生長（圖1）。

2.1.2不同組織部位對北蟲草長勢的影響

匍匐型菌絲的有無可作為判定菌種優劣的依據，其量越多，菌種質量越優[3]。隨着培養時間的延續，在培養3種不同北蟲草部位的試管中，均產生了白色菌絲，長勢上並沒有出現差異。

2.1.3不同組織部位對滿管時間的影響

經過若干天的培養，3種不同部位的北蟲草菌絲體並未出現明顯的滿管現象。

2.1.4孢子分離法分離北蟲草菌種的研究

孢子分離法培養前期如圖2-A，培養2d後，培養基上已有少量的菌絲生成（圖2-B），培養5d後，培養基上已經形成了大量的菌絲（圖2-C）。此時，在無菌條件下取出子實體，繼續培養10d。從萌發時間和長勢上看，孢子分離法分離得到的菌株品質更優。