黑木耳制種技術

(一)母種的製備

用試管制成斜面培養基，並接種原始試管種(保留種，並用於生產的母種即爲生產母種，可用於擴接原種。

1．培養基配方

配方一綜合馬鈴薯培養基

馬鈴薯200克葡萄糖20克磷酸氫二鉀2克硫酸鎂0.5克

維生素B110毫克瓊脂20克水1000毫升PH值自然

配方二合成培養基

馬鈴薯20克葡萄糖20克磷酸二氫鉀2克蛋白腖10克牛肉膏5克

酵母膏5克硫酸鎂0.8克水1000毫升PH值自然

2．培養基製作方法

先將馬鈴薯洗淨去皮切成簿片，稱取200克，加水1000毫升，煮沸15—20分鐘，用4層紗布過濾，取其濾液並補足水至1000毫升，加入瓊脂20克，再加熱，瓊脂溶化後，再加入其它配方中的藥品。

培養基的分裝，應在培養凝固前進行（瓊脂培養基40℃凝固）一般用漏斗，或分裝瓶，下端連接一段軟橡皮管，橡皮管下面再連接一水段玻璃管，在橡皮管上安裝一個止水彈簧夾，分裝時將玻璃管細口插入試管內，但不要碰到管壁，每支試管裝入量爲度管長度1/4。裝好後塞上棉塞，每10支試管扎一捆，棉塞上用塑料紙封紮好，用線繩捆紮起來。

3．滅菌

將分裝後的試管扎捆好，放入高壓蒸氣滅菌鍋，在1公斤/釐米壓力下(鍋入溫度達121℃)滅菌20分鐘,使微生物包括芽子色全部殺死。待壓力降到0度時，慢慢放出鍋內氣體，趁培養基沒有凝固時，將試管擺成斜面。

4．接種、培養

透過無菌操作方法將菌種接入試管斜面上，置28℃、3天后將溫度降至24℃繼續培養，12—15天左右，菌絲長滿整個試管斜面，即成(生產)母種。

(二)原種、製備

母種接種到原種培養基上，進行擴大繁殖育種即爲原種，原種一般採用廣口瓶或袋裝。

配方一木屑麩皮培養基

闊樹木78%麩皮20%糖1%石膏粉1%水65%PH值自然

配方二棉籽殼木屑混合培養基

棉籽殼90%糖1%麩皮5%過磷酸鈣3%石膏粉1%PH值自然

2．拌料與裝袋

選用新鮮無黴變原料，根據生產所需的數量，計算配料總量，將麩皮、石膏粉均勻的混合在培養料裏，糖和過磷酸鈣溶於水解後，按上述乾料量加入水，比例爲1：1、3拌勻，培養料含水量60%爲宜，含水量以手緊握培養料指縫間有水欲滴爲宜。堆悶30分鐘後，裝瓶(袋)。用機械或人工裝袋稍加壓實。(塑料袋規格通常爲9*21*0、04即，而袋寬9釐米，長21釐米，單層厚4釐米)實，在袋口外套入塑料環，形成象瓶子一樣，然後在袋口內塞鬆緊適宜棉塞、或用牛皮紙包紮好。

原種滅菌方法有兩種，高壓滅菌和常壓滅菌。高壓滅菌又稱加壓蒸氣滅菌，滅菌原理：在高溫(120℃)、高壓(1公斤/釐米2)條件下滅菌2-3小時，將芽孢在內的微生物全部殺死。常壓滅菌稱流通蒸氣滅菌，由於滅菌設備、條件和基本因素的不同，溫度變動在90-103℃之間，其熱力、穿透力不強，在一定溫度下維持足夠時間達到滅菌目的，通常在100℃下維持8-10小時。

4．接種與培養

不論用接種箱或接種室接種，在接種前，需對接種箱或接種室用0、2%的來蘇水或漂白粉進行消毒處理，然後將滅菌過的料瓶(袋)放入接種箱內或接種室內，用紫外線燈照射30分鐘後，在無菌條件下進行接種，或在接種前用煙霧劑密閉薰蒸消毒。即煙霧劑點燃消毒時應關閉門窗。接種室消毒，一間房需點燃3盒50克規格煙霧劑；接種箱消毒每次僅用重量爲40克，但又細分爲20包的其中2包點燃即可(每包2克)。一般18×180釐米，母種試管每支可接4—6瓶(袋)原種。將接種後的菌種瓶(袋)放入發菌室培養。以培養室溫度22-26℃，相對溼度爲80%以下，光線爲弱散射光，發菌期間應保持良好的通風條件。原種從接種到菌絲長滿瓶(袋)需30—40天。

(三)栽培種製備

原種進一步擴繁，即爲栽培種。栽培種一般採用塑料袋製備，規格爲15×33×0、05，用無棉蓋體封口。一瓶原種可接50瓶(袋)栽培種。栽培種培養基配方及拌料、裝袋、滅菌、接種、發菌管理與原種用塑料袋製備時一致。

(四)菌種質量鑑定

菌種質量不僅與能否成功發菌有關，也關係到產量和效益，從事木耳栽培必須嚴把質量關。菌種的質量鑑定有兩個方面的含義：一是分離培養的菌種是否是栽培所需種類。二是菌種是否爲優良菌株。黑木耳菌種正常菌絲應潔白，生活力旺盛，發菌培養45天后，瓶(袋)間自上而下會出現菊花狀或梅花型膠質原基，顏色明褐至黑褐色。如果瓶(袋)底積淡黃色液體，或上半部出現黃色粘液，培養基收縮，爲過期老化菌種，應予淘汰。

如果菌種菌絲僅發至瓶(袋)1/3-1/2處時出現淡黑色的膠狀耳基，說明菌種早熟，或擴大次數太多，或由於培養室光線過強。若菌絲只長一個角落而不蔓延，可能是培養基太乾、過溼或乾溼不均引起。若菌絲蔓延停止不前，並有一明顯抑制線，多爲雜菌所致。在發菌過程中，發現雜菌應及時檢出不用。