日本小葉常春藤組織培養
日本小葉常春藤為常春藤屬中耐寒性較強的品種,植株生長健壯,莖葉濃綠,節間短粗,組織充實,露地越冬性能良好,在筆者所在的揚州地區已經受了-10℃至-15℃的低温考驗。霜後莖葉略披紅暈,為不可多得的冬綠型垂直綠化材料,具有很好的推廣應用前景。採用莖節、葉片為外植體,進行組織培養無性系快繁,可有效解決生產應用過程中種源稀少、繁殖速率低的矛盾。
材料與方法
採用多年生日本小葉常春藤一年生莖枝的莖節和葉片為外植體。莖節外植體初代培養,材料截成厚0.5釐米的小段,葉片外植體切為0.4×0.5釐米的方塊。培養温度25℃,光照強度2000lx,光照時間每天12小時。
技術及應用
莖節外植體帶菌度較高,但組織發育充實,故以中等強度滅菌劑處理為好,即70%酒精0.5分鐘+0.1%昇汞10分鐘,污染率為29.2%。若將0.1%昇汞處理時間增加至15分鐘,雖污染率下降至12.5%,但殺傷率將上升,總體存活率反而會下降,故不宜採用。莖尖外植體因其組織幼嫩,試驗中雖使用低強度5%的次氯酸鈉處理15分鐘,褐變死亡率仍高達72.9%;再降低滅菌強度,雖死亡率可以下降,但污染率又上升,在實際操作中較難掌握,故外植體的選用以莖節為宜。
初代培養效應與取材時期密切相關。4月初正值露地栽培植株萌芽期,接種後外植體萌發率高,達82.4%;5月上旬取用的為當年萌生新梢,材料帶菌度低,故接種後污染率低,為20.1%;7月底進入高温多濕的梅雨季節,外植體帶菌度急劇上升,滅菌困難,材料污染率上升,高達89.4%。故日本小葉常春藤的莖節組織培養,外植體取用時間以4月初到5月上旬為宜。
組織培養中,生長素和細胞激動素的添加,均以低濃度為宜。初代培養基以6-BA1.0毫克/升-1+2.4-D0.1毫克/升-1為好,誘芽率可達90.5%,顯著高於其他處理。誘芽生長量達1.2釐米,呈極顯著變異水平。繼代增殖培養,在6-BA1毫克/升-1水平,生長素配比量仍以低水平為宜,生長素類別以NAA優於2.4-D,試驗範圍內以MS+6-BA1.0毫克/升-1+NAA0.01毫克/升-1的增殖係數為高。
葉片愈傷組織誘導培養,接種3天葉片捲曲增厚。這不僅和6-BA/NAA相對比值有關(1∶3>1∶2>1∶1),且和其用量水平緊密相關,綜合試驗結果以MS+6-BA1.0毫克/升-1+NAA3.0毫克/升-1時高,達82.4%。
莖節培養過程中,經多次繼代繁殖,發現有皺葉性狀變異的個體出現。同樣的性狀變異,在其他常春藤物種中有選育成新品種的應用範例,若能將變異性狀加以分離、固定,並擴大繁殖,在提高其觀賞特性上具良好的應用前景,不失為一條途徑。若能將組織培養技術和輻照誘變等育種手段相結合,則對常春藤育種研究有很大幫助。
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