阿維菌素製備方法
阿維菌素製備方法
產生菌由Streptomycesavermitills所產生。其為鏈黴菌中的一個新種,屬灰色鏈黴菌(與其類似的melbeycin的產生菌則為吸水鏈黴菌)。
形態為氣生菌絲分枝,孢子一般在燕麥瓊脂、甘油、天冬素、無機鹽、澱粉及蛋清瓊脂上出現。經電子顯微鏡觀察,其孢子絲開始為緊密螺旋,而後期逐漸鬆開。孢子鏈上孢子一般超過15個,呈圓至橢圓狀,表面光滑。
菌種的選育十分重要,不同的Avermectin的產生菌種使發酵液各組分的含量有所不同,選用新的高產菌種不僅提高Avermectin的總單位,還使B1組分的比例明顯提高。
菌種的儲存Avermectin產生菌在YMS斜面上(酵母膏4.0g、麥芽汁10.0g、可溶性澱粉4.0g、瓊脂20.0g、水1000mL、pH=7.4)生長,再將孢子置於20%的甘油水溶液中,於-30℃儲存。
種子製備通常可採用兩種培養基,在1000mL水中的成分如下。
A:Cerelose1.0g、可溶性澱粉10.0g、牛肉膏3.0g、ArdaminePH5.0g、N-Z-AmineE5.0g、MgSO4·7H2O0.05g、KH2PO40.182g、Na2HPO40.190g、CaCO30.5g、pH=7.0。
B:乳糖20.0g、distillers'Solubles15g、ArdaminePH5.0g,pH=7.0。將甘油孢子貯藏液接種在上述種子培養液中,於28℃培養1~2d後再接種到發酵培養基中。接種量通常為3%~5%。
生物合成生物合成可採用下列發酵培養基。
A:Amidax40g、distillers'Solubles7g、ArdaminePH5g、CoCl2·6H2O0.05g、水1000mL,pH=7.3。
B:Cerelose45g、Prepionlzedmilknutrient24g、ArdaminePH2.5g、聚乙二醇P-20002.5mL、水1000mL,pH=7.0。
研究表明,Avermectin的產生量與下列因素有關:①菌種。菌種選育不僅可提高微生物產生的發酵單位,而且能改變各組分的比便,由此提高所需組分含量,據報道,加入Slnefungin及S-adenosylmethione等甲基轉移酶抑制劑也可改變產物中B和A的比例;
菌種形態應選擇菌絲豐滿的菌種進行發酵(nn所用培養基為糊精0.4%、肉膏1%、酵母0.4%、瓊脂2%,pH=7.0)。②C/N比。對產量和組分影響甚大。③消泡劑。聚乙二醇是較好的消泡劑,它不僅可提高發酵單位,且可抑制發酵過程中一種橙黃色蠟狀物的產生。④攪拌。對發酵效果影響較大,由於菌絲體對葉輪剪下較為敏感,故採用水翼輪式攪拌裝置能改善供氧,提高產量。⑤無機鹽。其他各種無機鹽對發酵無有利的影響。
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